产品货号：
BTN15-83800
中文名称：
牛赤羽病毒(AKAV)荧光定量qRT-PCR试剂盒(探针法)
英文名称：
Akabane Disease Virus RT-qPCR Kit(Probe Method)
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本公司以探针法qRT-PCR技术为基础开发了专门检测赤羽病病毒RNA的试剂盒。
保存：-20℃，有效期1年。
引物-探针干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入162μL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。
一、稀释标准曲线样品以101～106拷贝/μL这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本制品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。如果需要RNA阳性样品，需要另外订购。
二、样品RNA的制备
三、Probe qRT-PCR反应以20μL体系为例，在样品制备室进行
四、数据处理
相关搜索：牛赤羽病毒(AKAV)荧光定量qRT-PCR试剂盒(探针法)，牛赤羽病毒，AKAV，RT-qPCR，qRT-PCR，Akabane Disease Virus RT-qPCR Kit(Probe Method)
赤羽病病毒(Akabane Disease Virus)遗传物质为负链单股RNA，并含有3个核衣壳，于1961年在日本群马县赤羽村的伊蚊和库蚊体内分离得到，因此命名为“赤羽病病毒”，也称阿卡班病病毒(Akabane Virus)。本病毒可引起多种动物感染赤羽病(阿卡班病)，该病是牛、羊的一种以流产、早产、死胎、胎儿畸形、木乃伊、新生胎儿发生关节弯曲积水性无脑综合症为特征的病毒性传染病。怀孕的牛、绵羊和山羊对赤羽病毒最易感，围产期的胎儿常受到感染。马、水牛、骆驼也可感染，目前对赤羽病最可靠的预防方法是对家畜进行赤羽病疫苗接种。因此快速准确检测赤羽病病毒具有重要意义。
- 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。
- 引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以达到1000拷贝/反应。
- 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 特异性高，引物是根据赤羽病病毒RNA高度保守区设计，不会跟其他生物的RNA发生交叉反应。
- 既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5各数量级。
- 本制品只能用于科研。
| 组分 | 规格 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 50μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 赤羽病病毒qRT-PCR引物-探针干粉 | 50T |
| 赤羽病病毒qRT-PCR阳性对照(107拷贝/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期1年。
引物-探针干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入162μL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。
一、稀释标准曲线样品以101～106拷贝/μL这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本制品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。如果需要RNA阳性样品，需要另外订购。
- 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2，1。
- 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同)。
- 在6号管中加入6μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入6μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在4号管中加入6μL 1×105拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×104拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品RNA的制备
- 如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次样本制备所要求的起始样本体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
- 用自选方法纯化样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数RNA提取试剂盒兼容，也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。
三、Probe qRT-PCR反应以20μL体系为例，在样品制备室进行
- 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个RT-PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于RT-PCR阴性对照(用水做模板)，6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复，则标记N+4个RT-PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于RT-PCR阴性对照(用水做模板)，1个用于RT-PCR阳性对照(直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
- 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
成分 样品管
N+2个RT-PCR
阴性对照标准曲线样品管
(1～6管)探针法qRT-PCR缓冲液 各10μL 10μL 各10μL 探针法qRT-PCR酶混合液 各1μL 1μL 各1μL 赤羽病病毒qRT-PCR引物-探针混合液 各3μL 3μL 各3μL N+2个待测RNA样本 各6μL 不加 不加 超纯水 不加 6μL 不加 第6步所得标准曲线样品稀释液(1～6号) 不加 不加 各6μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行RT-PCR：
过程 温度 时间 逆转录 50℃ 15min 预变性 95℃ 3min PCR反应
(45个循环)95℃ 15sec 60℃ 60sec(采集FAM通道的荧光信号，
淬灭基团为TAMRA)
四、数据处理
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须没有读数，或者大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于40。对待测样品，如果其Ct没有读数、大于或等于40则均为阴性，如果小于40则为阳性。
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